Методика стерилизации и изоляции растительного материала

Для работы необходимо иметь переносной (экспедиционный) бокc для стерилизации тканей. Размеры бокса зависят от объема и специфики растительного материала. В боксе должны свободно помещаться стерилизационные стаканы, спиртовка спирт, культуральные сосуды, стерильная бумага, минеральное масло, вата, вода, пинцет. Перед работой бокс стерилизуется горячим воздухом и протирается спиртом. В боксе размещается все оборудование и растительный материал. Перед стерилизацией и изоляции тканей тщательно моют руки и протирают их 50% спиртом. В качестве стерилизатора используется 0,2 % сулема. Стерилизaтop также как и культуральные сосуды со средами приготовляется заранее.

Спилы ветвей промываются теплой водой с мылом и щеткой затем дистиллированной водой. После приготовления срезов (биопроб) их моют дополнительно в проточной воде. Перед стерилизацией поверхность срезов парафинируется с целью избежать дитоксикации тканей сулемой. Парафинирование срезов можно не проводить при стерилизации перекисью водорода (время стерилизации 12мин., промывка водой однократная), далее срезы протирают ватой, смоченной сначала 98% а затем 100% спиртом. Дальнейшая стерилизация ведется в боксе. Срезы стерилизуют в 0,2% растворе сулемы в течении 45 мин. Затем промывают 4 раза стерильной водой (каждый раз по 5-10 мин.) и используют для изоляции.

Для изоляции биопроб рекомендуется агаровая среда Мурасиге и Скуга или среда Уолкера для взращивания хвойных в водной культуре. Простерилизованный материал (срез) укладывается на поверхность среды. В случае агаровой культуры основание среза погружается в агар на 1-2мм. Ткани, помещенные на агар заливают слоем стерилизованного минерального масла (высота слоя-38мм.). Культуральный сосуд (пробирка, колба) снова закрывается стерильной пробкой.